動物癥狀觀察：

表現為體重減輕、弓背豎毛，在回輸后的一個月后死亡。

1、CCKBR基因敲除及高鹽飲食小鼠血壓情況

高鹽喂養(yǎng)8周后，通過左頸動脈插管法檢測小鼠的血壓，我們發(fā)現，胃泌素受體敲出小鼠的血壓相比于野生型小鼠明顯升高。給予高鹽飲食之后，胃泌素受體敲除小鼠的血壓進一步升高。而野生型小鼠的血壓沒有明顯升高。說明小腸CCKBR確實能夠參與小鼠血壓的調節(jié)。

2. CCKBR基因敲除及高鹽飲食小鼠尿鈉情況

我們使用代謝籠對四組小鼠的尿液進行收集并檢測，結果表明與野生型小鼠相比，胃泌素受體敲除小鼠的尿鈉水平降低。和給予高鹽飲食的野生型小鼠相比，給予高鹽飲食的胃泌素受體敲除小鼠的尿鈉水平也顯著降低。說明CCKBR基因敲除及高鹽飲食能夠誘導小鼠鈉水代謝異常，進而誘發(fā)高血壓。

3. CCKBR基因敲除及高鹽飲食小鼠小腸刷狀緣膜上NHE3調節(jié)蛋白的表達

為了進一步確定胃泌素受體敲除后，小腸絨毛刷狀緣膜上NHE3調節(jié)蛋白的作用，我們提取了CCKBR+/+小鼠和CCKBR-/-小鼠對照組和高鹽組小腸的膜蛋白，我們發(fā)現對照組CCKBR-/-小鼠和對照組CCKBR+/+小鼠相比，NHE3、NHERF1、NHERF2、NHERF3、ezrin和IRBIT的表達升高，高鹽飲食之后，CCKBR-/-小鼠小腸膜蛋白中NHE3、NHERF1、NHERF2、NHERF3、ezrin和IRBIT的表達進一步升高。這說明胃泌素受體缺失之后，胃泌素對NHE3調節(jié)蛋白的抑制作用消失，進一步誘發(fā)鈉水平衡失調以及高血壓的發(fā)生發(fā)展。

1、模型名稱：小腸CCKBR基因敲除鹽敏感性高血壓模型（CCKBR條件性敲除），名CCKBR-Vilin-Cre

2、品系來源：1.C57小鼠，C57-CCKBR-Vilin-Cre

對照：C57 -CCKBR-Vilin-FloxP

品系來源 ：1)遺傳背景及亞系:1921年Ltle用 AbbgLathrop的小鼠株雌鼠57號與雄鼠52號交配，而得C57BL6。亞系:C57BL6、C57B/6、C57BL/6N等。 (2)毛色基因標記：aa、BB、CC（黑色）

(3)主要遺傳學特征：a免疫學特征：一般飼養(yǎng)條件下免疫球蛋白的量隨年齡而增加，而到生后20個月時則1gG增長緩慢，無菌飼養(yǎng)的絕對量較低。gM水平較高，出生12月以后，有的個體超過80ug/mL。無菌飼養(yǎng)的動物lgM量比一般飼養(yǎng)的高。細胞免疫低下者少見，這可能與自發(fā)腫瘤少有關。b。形態(tài)學特征：在新生鼠中，雌鼠為16.8%，雄鼠3%為小眼或無眼癥。0.6%后肢可見多趾癥，另外水頭癥占2%4%，耳頭癥占0.4%，交合不全占3%。c生理學特性：有強嗜酒精性。對放射性照射為中等強度感應度，LD50為630+4R，將雄鼠皮膚移植到同系的雌鼠身上，約20日被排斥掉，這是因為在組織相容性抗原中的雄抗原在C57BL中非常顯著。d癌發(fā)生率：乳癌發(fā)生率低，為01%，白血病為7%-16%化學致癌成功率低，放射性照射較容易誘發(fā)肝癌。

3、誘導方法：利用Cre/LoxP（特異性重組酶系統）原理構建小腸CCKBR特異性敲除鼠（CKBR-Vilin-Cre），即在待翹除的目的基因CCKBR的DNA兩端各放置一個Loxp序列，得到flox小鼠（flankedby loxP），將flox小鼠與帶有小腸細胞特異性表達Cre的小鼠進行交配繁殖，已獲得在小腸把CCKBR敲除掉的CCKBR-Vilin-Cre小鼠。

8周齡CCKBR-Vilin-Cre小鼠及其對照CCKBR-Vilin-FloxP，分別給予高鹽飲食（8%的NaCl）和正常鹽飲食（4%的NaCl），連續(xù)8周，每周測量血壓。

高血壓是由多基因、多環(huán)境因素及個人不良習慣相互作用而導致的一種慢性復雜疾病，也是危害人類健康的主要疾病之一。鹽是高血壓的重要環(huán)境因素，個體對鹽負荷或限鹽呈現不同的血壓反應，因此存在鹽敏感性問題[1]。鹽敏感性是高血壓、心腦血管病和其它疾病（如哮喘、胃癌和腎功能不全等）發(fā)病及致死的一個潛在危險因素 [2]。因此在高血壓臨床診治過程中，考慮鹽敏感性將有利于對高血壓分類、危險分級以及對癥治療。

鹽敏感性通常涉及人口、種族、社會因素以及腎功能、激素水平和飲食習慣等[3]。不同種族和人群鹽敏感性個體的檢出率不同，而且血壓的鹽敏感性隨年齡增長而變化，特別是高血壓患者。鹽敏感性由Weinberger ADDIN EN.CITE[4]給出定義：靜脈滴注2L生理鹽水，測量平均動脈壓（MAP），次日早晨給予低鈉飲食后再測量MAP，兩次MAP相差≥10mmHg為鹽敏感性，否則為鹽耐受性。Yatabe ADDIN EN.CITE ADDIN EN.CITE.DATA [5]定義鹽敏感指數（SSI）為低鹽和高鹽飲食后MAP的差值與低鹽飲食MAP的商，若SSI≥5%為鹽敏感性。

高鹽攝入引起血壓升高主要有兩方面原因：一方面是腎小管對Na+ 重吸收增加，導致水鈉潴留，血漿容量增加，從而血壓升高；另一方面是內源性哇巴因物質分泌增多，特異性抑制鈉泵，胞內鈉離子濃度增加，Na+/Ca2+交換體被激活，細胞內Ca2+ 濃度升高，最終導致血管平滑肌或心肌收縮，引起高血壓[6]，可見鈉水調節(jié)紊亂是鹽敏感性高血壓發(fā)病的主要誘因。有研究表明，胃腸道在維持機體鈉水平衡方面具有重要的作用。人體胃腸道每天大約吸收7～9升液體，這一吸收過程主要是由鈉依賴的營養(yǎng)物質同向轉運體和鈉離子轉運體共同介導。在基礎狀態(tài)和進食后，小腸內鈉吸收主要是通過鈉氫交換體（NHE）。在小腸細胞的頂膜上，將腸腔內的鈉轉運至小腸細胞的電中性鈉氫交換體主要有NHE2、NHE3和NHE8，在結腸中主要的電中性鈉吸收通道為ENaC。在這些鈉吸收通道中NHE3是非常重要的一個鈉離子吸收通道。但小腸NHE3的特異性作用還不清楚。DR. Rieg構建了小腸特異NHE3敲除小鼠VillinCre, 并發(fā)現該小鼠成年率為0，均為出生后幾天死亡，證實腸道中NHE3調節(jié)鈉水平衡至關重要。

基于腸道NHE3對于機體鈉水平衡的調節(jié)作用，相關領域已經開展了NHE3抑制劑藥物用于高血壓治療的研究，但是NHE3抑制劑都存在明顯的副作用，大鼠及人體實驗證實NHE3抑制劑藥物能夠引發(fā)中度或重度腹瀉。已有測序研究發(fā)現NHE3編碼基因SLC9A3與先天性鈉腹瀉（CSD）密切相關，SLC9A3 基因N端鈉離子轉運結構域發(fā)生突變，能夠引發(fā)NHE3功能缺失，從而誘導CSD發(fā)生。提示直接抑制NHE3的藥物雖然能夠顯著降低血壓及鈉離子重吸收，但無法解決對機體的副作用。因此，我們研究通過其它通路間接抑制NHE3功能來降低血壓。最新研究發(fā)現，胃泌素不僅能夠調節(jié)胃酸分泌，還對機體內腎臟鈉氫交換體3（NHE3）等離子泵具有重要的調節(jié)作用。同時，我們實驗室先前的研究結果也表明，胃泌素能夠通過抑制NHE3活性參與機體鈉水代謝和血壓調節(jié)，從而改善鹽敏感性高血壓大鼠的血壓狀況。由于小腸中存在大量的胃泌素受體，因此我們采用基因工程的方法，敲除小腸道CCKBR基因以抑制胃泌素對NHE3活性的調節(jié)作用，從而造成胃腸道鈉水平衡的失調，誘導小鼠鹽敏感性高血壓模型。